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NRPB76 IMAC琼脂糖凝胶FF

发布日期:2020-05-09 阅读次数:2363

品  名:IMAC琼脂糖凝胶FF

英文名:Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow, IMAC NUPharose FF

目录号:NRPB76L、NRPB76S(预装柱)

规  格:20 ml,100 ml,1L,1 ml预装柱,5 ml预装柱,特殊规格订制

运  输:2 ~ 30℃,常压、避光

贮  存:20%乙醇,2 ~ 25℃

保质期:5年


相关介绍: 

  螯合金属离子亲和层析(IMAC)琼脂糖凝胶FF具有螯合金属离子的能力,如螯合Cu2+、Zn2+、Co2+、Ni2+、Fe3+等,螯合金属离子后可用于富含组氨酸、色氨酸、半胱氨酸的蛋白质纯化,其中最常见的是用于融合了6-8个组氨酸标签的蛋白质纯化。与IDA琼脂糖凝胶FF相比,IMAC琼脂糖凝胶FF一般可以更牢固的结合金属离子,在纯化标签蛋白方面,有可能获得更高纯度的样品。


技术指标:

基质

6%高度交联的琼脂糖凝胶

配基密度

≥40 μmol/ml

螯合载量

≥15μmol Cu2+/ml

填料粒径

60~180 μm

最大流速

800 cm/h

推荐流速

50-100 cm/h

pH稳定性

pH 2~14

0.3 MPa

载量

≥40 mg His-tag重组蛋白/ml(螯合Ni2+)


使用方法:

1、色谱柱装填

(1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样,液体最好做脱气处理。

(2)在柱子下端加入蒸馏水,以除去柱子中的空气,关闭柱子出口,在柱内保留少量的蒸馏水。

(3)将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时,要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流,以减少气泡的产生,让填料先自然沉降,建议柱床高度不超过20cm。

(4)柱压不超过0.3MPa,如果装柱系统中无法测柱压,则正常使用流速填装。

(5)填装好的IMAC琼脂糖凝胶FF柱用5个柱体积蒸馏水清洗,使用的流速建议为100cm/h。

2 螯合金属离子

(1)根据需要选择金属盐,一般配置0.1-0.2M金属盐溶液,常见的有CuSO4、ZnSO4、NiSO4、CoCl2等。注意金属盐溶液的pH以偏酸性为宜(如pH4-6,Fe3+一般需要pH3),防止在螯合时pH上升产生沉淀。

(2)蒸馏水清洗后的IMAC琼脂糖凝胶FF用1-3个柱体积金属盐溶液过柱螯合金属离子,然后用5个柱体积以上的蒸馏水清洗层析柱,去除游离的金属盐溶液。

(3)用5个柱体积以上的乙酸缓冲液(20mM 乙酸-乙酸钠,1M 氯化钠,pH4.0)清洗,去除结合不牢固的金属离子,减少在使用过程的脱落。

(4)处理完后可用结合缓冲液平衡层析柱,用于目标蛋白的纯化。

3、纯化目标蛋白

(1)选择缓冲液:一般选用pH6-8的结合缓冲液,常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液、20-200mM Tris-HCl缓冲液等。在缓冲液中一般要加入0.15-0.5M的NaCl,以消除离子交换作用。在初次使用IMAC琼脂糖凝胶FF,推荐使用50mM PBS(50 mM NaH2PO4,0.5M NaCl,NaOH调节pH 7.4)作为结合缓冲液。

(2)样品处理:样品的缓冲液应与所选结合缓冲液一致。为保证缓冲液一致,可以在结合缓冲液中破碎细菌、或调解pH与结合缓冲液一致、或交换至结合缓冲液(常用方法有透析、超滤、脱盐柱换液等)、或用结合缓冲液稀释2-10倍等。样品上柱前应0.45μm过滤。

(3)平衡上样:螯合金属离子的IMAC琼脂糖凝胶FF用结合缓冲液平衡5个柱体积,然后将样品上柱,上完样后,用结合缓冲液平衡。

(4)洗脱优化:螯合金属离子的IMAC琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱。初次实验不知道洗脱的咪唑浓度,可尝试不同的浓度洗脱,建议在结合缓冲液中分别加入5mM、10mM、20mM、50mM、100mM、200mM、500mM咪唑(咪唑为碱性物质,加入咪唑后需重新调节pH),浓度从低到高,先后分别洗脱和收集,通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份。

4、再生清洗

(1)多次使用后或需要更换螯合的金属离子,必须将凝胶脱去金属离子再生。脱金属离子方法:用5-10个柱体积蒸馏水淋洗柱子,再用10个以上柱体积的100 mM EDTA淋洗柱子,再用3-5个柱体积的0.5M NaCl洗掉残留的EDTA。

(2)多次使用的柱子脱镍后一般需要清洗。清洗方法:用0.1-1.0M NaOH反向清洗柱子,流速50cm/h,保持1-2h,能去除结合强的杂质,同时也能去除热源。NaOH清洗后应立即用5个柱体积以上的蒸馏水清洗至中性,清洗后可按照螯合金属离子的方法重新螯合金属离子。

5、保存

IMAC琼脂糖凝胶FF和螯合金属离子后的IMAC琼脂糖凝胶FF都可以用20%乙醇保存,一般蒸馏水清洗后,用3个柱体积20%乙醇清洗。20%乙醇清洗后的层析柱和凝胶可放置在2-25℃条件下保存。

中文名

英文简称

货号

规格

产品描述

重力预装柱

IMAC琼脂糖凝胶FF
     重力预装柱

Immobilized Metal ion
     Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

NRPB76S-Z11

1*1mL

1支*1ml

NRPB76S-Z41

4*1mL

4支*1ml

NRPB76S-Z15

1*5mL

1支*5mL

NRPB76S-Z25

2*5mL

2支*5mL

AKTA中压预装柱

IMAC琼脂糖凝胶FF
     中压预装柱

Immobilized Metal ion
     Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

NRPB76S-Y11

1*1mL

1支*1ml

NRPB76S-Y41

4*1mL

4支*1ml

NRPB76S-Y15

1*5mL

1支*5mL

NRPB76S-Y25

2*5mL

2支*5mL

填料

IMAC琼脂糖凝胶FF

Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow

NRPB76L-10

10mL

1瓶*10ml

NRPB76L-20

20mL

1瓶*20ml

NRPB76L-100

100mL

1瓶*100ml

NRPB76L-500

500ml

1瓶*500ml

注:足球买球生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积


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